一、準(zhǔn)備工作
????微柱凝膠試劑卡的準(zhǔn)備：觀察外觀，如有干膠、雜質(zhì)、氣泡不可使用，之后將卡放置室溫（18－25℃）平衡，再用專用離心機離心5分鐘。
????（二）檢測標(biāo)本的準(zhǔn)備：
?????1．紅細(xì)胞懸液的制備：將受血者與獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞和血漿分離，各取其壓積紅細(xì)胞10ul，分別加入含1.0－1.2毫升紅細(xì)胞稀釋液的兩個試管中，外觀應(yīng)為均勻淡紅色，無絮狀物和血塊。
?????2．血清標(biāo)本的制備：采集被檢對象靜脈血，放入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，取上清。
二、操作步驟
1．將準(zhǔn)備好的抗人球蛋白交叉配血卡做好標(biāo)記。
2．將獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液1滴（或50μl）與受血者血清1滴（或50μl）先后加入主側(cè)管中。
3．將受血者紅細(xì)胞懸液1滴（或50μl）與獻(xiàn)血者血清1滴（或50μl）先后加入次側(cè)管中。
4．加樣后的試劑卡，置37℃孵育器中孵育15分鐘。
5．使用專用離心機離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500?rpm3分鐘），取出肉眼觀察結(jié)果。
結(jié)果判定：
1．陰性結(jié)果：紅細(xì)胞完全沉降于凝膠管底部，表明受血者與獻(xiàn)血者血型相合。
2．陽性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，表明受血者與獻(xiàn)血者血型不相合。
三、注意事項
1．應(yīng)用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫試驗檢測病人紅細(xì)胞時，一定要用適量EDTA的試管采血液標(biāo)本，該標(biāo)本不能放入4℃-10℃冰箱保存，以避免紅細(xì)胞在病人體外致敏所致假陽性反應(yīng)。
2．紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否則出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。盡可能應(yīng)用當(dāng)日采集的新鮮血做本試驗。如不得不用過夜血或陳舊血，則必須首先用該標(biāo)本做陰性對照試驗，以確定該標(biāo)本是否可以做本實驗。
3．血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必須充分去纖維蛋白，否則標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，阻礙陰性紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反應(yīng)。
4．如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反應(yīng)，也不排除其他原因所致溶血，故對此標(biāo)本一定認(rèn)真分析，并向上級主管技術(shù)人員報告并討論其原因。
5．每日試驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。
6．試劑卡應(yīng)放在18-25℃儲存，如若長期放在4℃冰箱，建議每1-2個月取出，用專用離心機離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。
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