一、準(zhǔn)備工作
（一）微柱凝膠試劑卡的準(zhǔn)備：觀察外觀，如有干膠、雜質(zhì)、氣泡不可使用，之后將卡放置室溫（18－25℃）平衡，再用專用離心機(jī)離心5分鐘。
（二）檢測標(biāo)本的準(zhǔn)備：
1．紅細(xì)胞懸液的制備：取被檢者壓積紅細(xì)胞10微升，加入1.0－1.2毫升紅細(xì)胞稀釋液，外觀應(yīng)為均勻淡紅色，無絮狀物和血塊。
2．血清標(biāo)本的制備：采集被檢對象靜脈血，放入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，取上清；或者靜脈血采入無抗凝劑試管中，4℃放置?12小時，或37℃放置2小時后離心，2000r/min,10分鐘，取上清（該上清不得有絮狀物或沉淀）。
二、操作步驟
1.?將準(zhǔn)備好的ABO.RhD血型定型試劑卡做好標(biāo)記。
2.?將待檢者紅細(xì)胞懸液分別加入**至第4管中，每管50ul。
3.?將待檢者血清分別加入第5和第6管中，每管50ul。
4.?將已知的A型和B型紅細(xì)胞0.8%濃度懸液或0.8%濃度ABO血型反定型紅細(xì)胞試劑，每管50ul分別加入第5和第6管。
5.?即刻使用專用離心機(jī)離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘），取出肉眼判定結(jié)果。
結(jié)果判定：
陽性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。
陰性結(jié)果：被檢紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部。
血型判定：
血型 |
抗A |
抗B |
抗D |
陰性對照 |
A細(xì)胞 |
B細(xì)胞 |
|
|
D 陽 性 |
A? |
+ |
— |
+ |
— |
— |
+ |
B? |
+ |
+ |
— |
+ |
— |
||
O |
— |
— |
+ |
— |
+ |
+ |
|
AB |
+ |
+ |
+ |
— |
— |
— |
|
|
D 陰 性? |
A? |
+ |
— |
— |
— |
— |
+ |
B |
— |
+ |
— |
— |
+ |
— |
|
O |
— |
— |
— |
— |
+ |
+ |
|
AB |
+ |
+ |
— |
— |
— |
— |
|
三、注意事項
1.?檢測標(biāo)本必須為抗凝血。
2.?紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否則出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。盡可能應(yīng)用當(dāng)日采集的新鮮血做本試驗。如不得不用過夜血或陳舊血，則必須首先用該標(biāo)本做陰性對照試驗，以確定該標(biāo)本是否可以做本實驗。
3.?血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必須充分去纖維蛋白，否則標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，阻礙陰性紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反應(yīng)。
4.?如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強(qiáng)烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反應(yīng)，也不排除其他原因所致溶血，故對此標(biāo)本一定認(rèn)真分析，并向上級主管技術(shù)人員報告并討論。
5.?若結(jié)果為±或1＋需進(jìn)一步分析，可能為亞型或弱化抗原。
6.?每日實驗前，先取出微柱凝膠卡放置一段時間至室溫，以防冷凝集。
7.?試劑卡應(yīng)放在18-25℃儲存，如若長期放在4℃冰箱，建議每1-2個月取出，用專用離心機(jī)離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。
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